前 言
本标准由黑龙江省农业委员会提出。
本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。
本标准由东北农业大学食品学院起草。
本标准主要起草人：于国萍、邵美丽、梁翠、安静。
豆角中血细胞凝集素的检验
1 范围
本标准规定了豆角中血细胞凝集素的检验方法。
本标准适用于生豆角、熟豆角中的血细胞凝集素的检验。
2 术语与定义
下列术语与定义适用于本标准。
凝集效价：以出现凝集的最大稀释倍数作为该样品的凝集效价指标。
3 方法原理
豆角中含有的凝集素对胃肠粘膜有刺激作用，能够凝集红细胞。凝集素是一种非免疫来源的、对糖及其缀合物可逆专一识别的蛋白质分子，它是能够可逆地结合到特异单糖或多糖上的蛋白质。能够选择性凝集人或动物血液中的红细胞。
本试验使用微量检测法，样品先由组织捣碎机捣碎，经离心上清液用生理盐水倍比稀释后与红细胞悬液进行凝血反应，在凝集板“V”形孔上进行检测，从而测定不同豆角及其制品的凝集效价。
4 试剂与仪器
4.1 试剂
如未标明规格，所有试剂均为分析纯；所有实验用水均为蒸馏水。
a) 抗凝剂(2％W/V EDTA钠盐溶液)
称取2gEDTA二钠盐用蒸馏水定容至100mL。
b) 生理盐水（0.9℅W/V NaCl溶液）
将9g NaCl用蒸馏水定容至1000mL。
c) 2％鸡红细胞悬液
取新鲜鸡血，置于装有抗凝剂（血：抗凝剂=9：1）的塑料离心管中。在2000r/min下离心10min，除去上清液，沉淀用生理盐水洗涤，再离心（如此重复三次），最后用生理盐水将沉淀配制成2℅（V/V）红细胞悬液备用。
4.2 仪器
a) 组织捣碎机
b) 96孔“V”型凝血板
c) 100mL移液器
d) 离心机
5 检测方法
5.1 取样
取50g～100g生豆角，弃去不可食部分。
5.2 预处理
将豆角洗净沥干，用组织捣碎机捣碎，用4层纱布挤出汁液，取适量装入离心管，在4000r/min下离心10min，取上清液备用。
5.3 检验
取干燥凝血板，于第1孔加离心液75mL，第2孔至第12孔各加入0.9℅生理盐水75mL；向第2孔加离心液75mL吹吸三次，吸出75mL转入第3孔，以此类推作倍比稀释，至第12孔，从第12孔取75mL弃去。再向各孔加入2%(V/V) 红细胞悬液75mL，每孔吹吸三次混匀。在室温下水平放置1.5h～2h后，肉眼观察结果，判定产生凝血反应的红细胞凝集效价结果。
6 判定
a) 无凝集：血球沉于“V”型孔底部中心，呈一小圆点。用“－”表示；
b) 半凝集：红血球少许沉积中部，周围有混浊带，外围液透明。用“＋/－”表示；
c) 凝 集：红血球形成薄层凝集，均匀分布整个孔底。用“＋”表示。
以出现凝集的最大稀释倍数作为该样品的凝集效价指标。
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