前 言
本标准由黑龙江省农业委员会提出。
本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。
本标准由东北农业大学食品学院负责起草。
本标准主要起草人：于国萍、李昕、于纯淼、徐红华。
食品中抗性淀粉含量的测定
1 范围
本标准规定了抗性淀粉含量的测定方法。
本标准适用于所有含有抗性淀粉的食品中抗性淀粉含量的测定。
2 术语与定义
下列术语与定义适用于本标准。
抗性淀粉：健康者小肠中不吸收的淀粉及其降解产物的总称。
3 原理
样品经前处理后，先在沸水浴中经耐高温α-淀粉酶水解，使可消化淀粉转化成葡萄糖，离心，弃去上清液，沉淀加入一定浓度的KOH使之溶解，经葡萄糖淀粉酶作用将其转化成葡萄糖，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量，乘以0.9即换算成抗性淀粉含量。
4 仪器设备
a) 离心机
b) 电热恒温水浴锅
c) 酸度计
d) 分光光度计
e) 电子分析天平
f) 容量瓶（100mL、1000mL）
5 试剂
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
a) 乙醚
b) 耐高温α-淀粉酶（120,000NU/mL）
c) 2mol/L氢氧化钾溶液
d) 磷酸盐缓冲液（pH5.8）
分别称取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,，加适量水使其溶解，定容至1000mL。
e) 醋酸盐缓冲液(pH4.4)
分别量取0.2mol/L醋酸溶液30.5mL及0.2mol/L醋酸钠溶液19.5mL混匀。
f) 葡萄糖淀粉酶（100,000U/mL）
g) 2 mol/L盐酸溶液
h) 葡萄糖试剂盒
6 检测方法
6.1 样品前处理
6.1.1 粮食、豆类、糕点、饼干等较干燥的样品
称取2g～5g（精确到0.001g）磨碎过40目筛的样品，置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30mL乙醚分三次洗去样品中脂肪，弃去乙醚。
6.1.2 蔬菜、水果、各种粮豆含水熟食制品
按1：1加水在组织捣碎机中捣成匀浆（蔬菜、水果需先洗净、凉干，取可食部分）。称取5g～10g匀浆（液体样品可直接量取），于250mL锥形瓶中，加30mL乙醚振摇提取（除去样品中脂肪），过滤去除乙醚，再用30mL乙醚淋洗两次，弃去乙醚。
6.2 抗性淀粉含量测定
6.2.1 抗性淀粉提取及转化
取0.5g试样放入50mL离心管，加入10mL(pH5.8)磷酸盐缓冲溶液和1mL耐高温α-淀粉酶，沸水浴30min，冷却至室温，离心(5000r/min，20min)弃上清液；加入10mL蒸馏水，洗涤沉淀，离心弃上清液(该步骤至少重复一次)，加入6mL2mol/LKOH溶解沉淀，室温下振荡30min，促进沉淀溶解，以2mol/LHCl调pH至中性，加入5mL醋酸盐缓冲液(pH4.4)和1mL葡萄糖淀粉酶。60℃水浴45min。离心(5000r/min，20min)，收集上清液，再用10mL蒸馏水洗涤沉淀(该步骤重复两次)，离心(5000r/min，20min)，取上清液。合并所收集上清液，定容至100mL容量瓶中。用葡萄糖试剂盒测样品中葡萄糖含量，乘以0.9即为抗性淀粉的量。
6.2.2 葡萄糖含量的测定
根据葡萄糖试剂盒以及使用说明书，用分光光度计测定样品中葡萄糖的含量，以蒸馏水为空白管，以试剂盒自带标准液为标准管，把试剂与工作液按一定比例混合，置37℃水浴15min，以空白管调零，在505nm波长下读取各管吸光度值。
7 测定结果计算
7.1 计算公式
7.1.1 葡萄糖含量计算公式：
 ……………………（1）
式中：
C1——标准管中葡萄糖的浓度，mmol/L；
7.1.2 抗性淀粉（RS）含量计算公式：
 ……………………………（2）
式中：
RS——抗性淀粉含量；
C2——样品中葡萄糖的浓度，mg/L；
V——溶液终体积，L；
W——样品重量，mg。
7.2 结果表示
同一试样取两个平行样测定，以其算术平均值作为测定结果，结果保留3位有效数字。
7.3 允许差
三个平行样的测定结果最大允许相对标准偏差为5%。
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