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前 言
本标准在制定过程中，经过调查研究、参考有关资料和分析实验结果，规定了马铃薯晚疫病田间检测方法和室内检测方法。
本标准的附录A和附录B为资料性附录。
本标准由黑龙江省农业委员会提出。
本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所（农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心）。
本标准主要起草人：郭梅、胡林双、王晓丹、闵凡祥、魏琪、董学志、马纪、李学湛。
本标准系首次发布。
马铃薯晚疫病检测方法
1 范围
本标准规定了马铃薯晚疫病检测方法。
本标准适用于马铃薯植株和块茎晚疫病田间及室内检测。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程
GB 8855 新鲜水果和蔬菜的取样方法
3 检测方法
3.1 田间检测
3.1.1 原理：马铃薯晚疫病菌引起的主要症状是鉴定该病的依据。
3.1.2 田间检测抽样:抽样标准按照GB 7331-2003中5.1.1.2规定的调查方法执行。
3.1.3 马铃薯晚疫病田间症状：
——叶部 染病叶片初期出现灰白色或水渍状浅褐色小斑点，逐渐扩大，自叶尖或叶缘向叶中部发展，或从中部叶脉附近形成病斑。天气潮湿时，病斑迅速扩大成圆形或不规则形大斑。与叶面病斑相对的背面病斑呈褐色至黑色，周围长出白色的霉状物，病斑边缘常出现一圈淡绿色或暗黄色的晕圈。严重时病斑扩展到主脉、叶柄和茎部，使叶片萎蔫下垂，整个植株的叶片和茎秆变黑。天气干燥时，病斑干枯成褐色，不产生霉状物。
——茎部 茎部的病斑是在皮层形成长短不一的褐色条斑，开裂或不开裂，在潮湿条件下也会长出稀疏的白色霉层。茎部感染可从叶柄病斑扩展至茎部，也可以从带病种薯侵入幼苗后向上扩展。
——块茎 感染的块茎初期在表面出现淡褐色或稍带紫色的圆形或不规则褪色小斑，以后稍微凹陷。病斑向薯块表层扩展，有的扩展到内层，呈深度不同的褐色坏死组织。
3.2 室内检测
样品的取样方法按照GB 8855中规定的取样一般要求执行，室内检测所用的水按照GB 6682中规定的三级水要求执行。
3.2.1 原理
马铃薯晚疫病的病原为致病疫霉菌（Phytophthora infestans（Monti）De Bary）。致病疫霉菌为鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、腐霉科、疫霉属真菌。菌丝无色无隔，较宽，有分支；孢子囊透明、柠檬状、薄壁、大小为21～38μm×12～23μm、顶生乳状突起；孢囊梗节状，各节基部膨大而顶端尖细，顶端产生孢子囊，孢子囊一般能产生4～8个游动孢子。可根据以上特征判断马铃薯晚疫病菌。
3.2.2 试剂
次氯酸钠、盐酸、75%酒精、无菌水。
所用试剂级别均为分析纯。
3.2.3 仪器
培养箱、生物显微镜、无菌操作台、载玻片和盖玻片、培养皿、酒精灯等。
3.2.4 操作步骤
若样品发病部位已有霉层存在，可挑取其霉层直接镜检，若无霉层，则按以下步骤进行。
3.2.4.1 叶片
将叶片用蒸馏水清洗晾干后，放入18℃培养箱内保湿培养1～4d后，挑取霉层直接镜检。
3.2.4.2 块茎
将块茎用自来水清洗，再用1%次氯酸钠溶液表面消毒3～5min，用无菌水清洗3次，晾干。将块茎放入18℃培养箱中保湿暗培养3～5d。挑取霉层直接镜检。
3.2.5 结果判定
将制好的玻片放在生物显微镜下观察，并记录病原菌形态特征。如果镜下的菌丝、孢子囊形态符合致病疫霉菌的形态特征，则判定为马铃薯晚疫病菌。
附 录 A
（资料性附录）
4 感染马铃薯晚疫病的植株和块茎田间的典型症状
图 1 马铃薯块茎感染晚疫病菌的症状
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2 马铃薯叶片感染晚疫病菌的症状
图 3 马铃薯植株感染晚疫病菌的症状
附 录 B
（资料性附录）
马铃薯晚疫病菌孢子囊形态
图  4 马铃薯晚疫病菌菌丝及孢子囊形态
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